神經生長因子（NGF）對交感神經和感覺神經元系統的發育和維持至關重要。NGF已被證實是一種復合物，由名為α、β和γ亞基的三種多肽組成。其中，亞基，β-NGF，是一種26.9kDa的蛋白質，含有241個殘基，參與神經元的存活和分化。此外，β-NGF還是TRKA受體的配體，而 TRKA 受體是痛覺和溫覺神經元分化和發育所的。
標記：
1.將細胞培養基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標記培養基。
2.提前將2×EdU標記培養基預熱，然后將150微升2×EdU標記培養基與等體積細胞培養基混合，獲得1×EdU溶液。
【注】：
①不建議替換全部培養基，這樣可能會影響細胞增殖的速度。
②配置好的培養基建議現用現配，用量以沒過細胞為宜。
3.孵育細胞2h，棄培養基。
【注】：
①培養時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態。
②大多數腫瘤細胞以及粘附細胞系均可采用2h的孵育時間。
4.以1xPBS清洗細胞兩次，每次5min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。
【注】：
對于貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。
實驗步驟：
1.將細胞以104-105個細胞/孔的密度接種在96孔板中，加入100μL培養基，含或不含待測化合物。在CO2培養箱中在37℃下培養細胞24小時。
2.向板中加入10μL不同濃度的待測物質。
3.在培養箱中將培養板培養適當時間（如6、12、24或48小時）。
4.向板的每個孔中加入10μL CCK-8溶液。小心不要將氣泡引入孔中。
5.將平板在培養箱中孵育1-4小時。
6.在讀板之前，在定軌振蕩器上輕輕混勻。
7.使用酶標儀測量450nm處的吸光度。
滬ICP備17029297號-5 管理登陸 技術支持：化工儀器網 GoogleSitemap