ACP是一種在酸性環境下催化蛋白質水解的酶。該酶主要用于酒精發酵、啤酒釀造、毛皮軟化、果酒澄清、醬油釀造、飼料等。
測定原理:
酸性條件下,ACP催化酪蛋白水解產生;在堿性條件下,還原磷鉬酸化合物生成鎢藍;鎢藍在680nm有特征吸收峰,通過測定其吸光度增加,來計算ACP活性。
自備儀器和樣品:
水浴鍋、磁力攪拌器、可調式移液槍、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、0.5mL EP管和蒸餾水。
粗酶液提取:
1、組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測。
2、細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);16000g, 4℃離心20min,取上清液置冰上待測。
3、血清等液體:直接測定。
樣本采集與保存注意事項:
動物肝臟等ADH富集樣本需冰上快速采集,采集后立即液氮速凍,-80℃避光保存。
植物樣本需液氮研磨后分裝凍存,全程避免反復凍融,防止酶活性降解。
樣本處理操作注意事項:
組織研磨全程在冰浴中進行,使用預冷研缽,間歇操作避免產熱導致酶失活。
細胞裂解采用溫和方式,超聲波破碎需控制功率和時間,裂解液中添加蛋白酶抑制劑。
酶液需通過預實驗系列稀釋,確保反應在3-5分鐘內保持線性區間。